大賽璐 DAICEL CROWNPAK® CR(+) / CR(-) 色譜柱使用手冊

CROWNPAK® CR(+) / CR(-)  色譜柱使用手冊

請在使用前仔細閱讀本《使用手冊》

  色譜柱描述  

所有色譜柱在出廠前都經過檢測。檢測條件、結果及批號請查閱《出廠檢測報告》。

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注意

使用CROWNPAK® CR(+) / CR(-) 需特別注意溶劑使用限制。

如果在該色譜柱使用了不恰當的分析條件，會導致固定相性能的急劇下降或使色譜柱失去保留能力。必須要避免純有機溶劑的狀態。

在色譜柱連接到液相儀器前，整個液相體系（包括進樣器及定量環）必須先用乙醇沖洗，然后再用100%蒸餾水沖洗。

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  手性識別機理  

CROWNPAK® CR(+) / CR(-) 的手性識別機理：在酸性條件下，樣品質子化成銨離子（- NH3+），與冠醚形成可逆復合物。

冠醚柱用于分離氨基酸及手性中心上有伯胺基團的化合物。

在CROWNPAK® CR(+)上，D-構型氨基酸先出峰。

在CROWNPAK® CR(-)上，D-構型氨基酸后出峰。

  操作條件  

說明：在HPLC 的壓力范圍內操作，色譜柱填料穩定。

           給定柱溫下，柱后壓與流速是線性關系。

① 推薦值可延長色譜柱使用壽命，但色譜柱耐受至150Bar 的壓力。

② 柱后壓是指由色譜柱本身引起的壓力。其值為總壓（液相體系+色譜柱）與液相體系（不接色譜柱時）壓力之差。

③ 通常，溫度越低，分離度越大。尤其對親水性樣品。對一些疏水性樣品，在較低溫度下樣品會在色譜柱上強保留。

  操作過程  

！如果您想使用下述沒有提及的流動相成分，請與我們聯系確認。

A – 流動相

本色譜柱需在以下的酸性條件下使用。

① · 通常流動相的pH范圍：pH 1 ~ pH 2 (在pH 9以內色譜柱是穩定的)。

 · pH越低，分離度越好；但是色譜柱使用壽命也越短。選擇剛好能滿足分離的pH值能延長色譜柱使用壽命。

 · 降低溫度也能增加手性選擇性。

 · 還可以使用其他的酸，比如硝酸和三氟乙酸。但一般推薦用高氯酸，在多數情況下，分離度更好，紫外吸收也很低。

② · 為縮短疏水性化合物的保留時間，可以在流動相中加些甲醇（15%）。

        甲醇的比例超過15%或者使用其他有機相，極易損傷色譜柱填料。

B – 流動相配制舉例

a) pH = 1.0

      稱取市售濃度為70%的高氯酸16.3g，用去離子水稀釋并定容至1L。

b) pH = 2.0

      量取100 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去離子水稀釋并定容至1L。

c) pH = 1.5

      量取316 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去離子水稀釋并定容至1L。

d) pH = 1.3

      量取500 mL pH 1.0的高氯酸水溶液，用去離子水稀釋并定容至1L。

說明：   - 流動相需完全脫氣或用氦氣徹底純化。

             - 疏水性化合物在柱上的容量因子取決于樣品本身，比親水性化合物出峰時間晚很多。但樣品在色譜柱上出峰早且分離度小，可以通過降低流動相的pH值（及柱溫）來優化。

             - 盡管鉀鹽不會損傷色譜柱，但它會使柱子徹底失去手性選擇能力。我們使用流動相及樣品時必須確保無鉀鹽。

  色譜柱保養/維護  

? 為延長柱子使用壽命，強烈建議使用保護柱。

? 樣品必須用純水溶解，并經接近0.5μm 孔徑的濾膜過濾。在配制樣品溶液時，如果甲醇的比例超過15%，也會對色譜柱造成不可逆的損傷。

? 樣品濃度太高，進樣后會引起柱效降低。樣品濃度只需有10-8 ~ 10-7 mol，即能看到紫外響應。

? 實驗結束后，請用蒸餾水沖洗色譜柱。長期保存(1 周以上)，用色譜柱保存溶劑水/甲醇(95/5 v/v)保存。

? 如果出現裂峰 (長期使用后)，將色譜柱反接，用純水沖洗。但一般不建議反接沖洗。

  注意事項  

? 強堿性的添加劑或樣品溶液不能進色譜柱，以免破壞色譜柱硅膠。

? 本《使用手冊》不適用于其他的大賽璐手性柱。

   嚴格按照《使用手冊》使用色譜柱，可延長色譜柱使用壽命。

? 如您在手性柱使用中有任何疑問，請聯系大賽璐授權代理商-廣州綠百草。

  換算表  

? 色譜柱內徑/流速

? 壓力

CROWNPAK® CR(+)分離氨基酸實例

嚴格按照《使用手冊》使用色譜柱，可延長色譜柱使用壽命。

本《使用手冊》不適用于其他的大賽璐手性柱

若您在手性柱使用中有任何疑問，

請聯系 DAICEL/大賽璐代理商-廣州綠百草。